禽流感病毒亞型有H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9和H9N2亞型。其間，高致病性H5N1亞型和2013年3月在人體上，初次發現的新禽流感H7N9亞型，尤為引人重視。不只造成了人類的傷亡，一起重創了家禽養殖業。

禽流感病毒H7亞型檢測試劑盒

【包裝規格】 25頭份/盒 & 50頭份/盒

【預期用途】

本試劑盒利用實時熒光PCR原理，定性檢測禽流感病毒H7亞型，對禽流感病毒引起的流感及其并發癥的診斷及療效評估有重要指導意義。

【檢驗原理】

本試劑盒針對禽流感病毒H7亞型基因組高度保守區域設計特異性引物和探針，在反應體系中含禽流感病毒H7亞型基因組模板的情況下，PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道信號進行實時監測和輸出，實現檢測結果的定性分析。

注：陰性對照為禽類基因組DNA，陽性對照為失去活性的禽流感病毒H7亞型cDNA。

【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復凍融，有效期12個月。

【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。

【樣本要求】

1.取咽喉拭子、泄殖腔拭子或血液樣本，禽肉取肌肉或內臟樣本，樣本處理方法參照相關文獻資料。

2.樣本采集后應立即檢測，若不能立即檢測，應置于-80℃冷凍保存，避免反復凍融，用干冰或液氮運輸。

【檢驗方法】

1. 試劑準備（試劑準備區）

（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

（2）核算當次實驗所需要的反應數（n），并根據如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數（1T）+陽性對照數（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數

(3)在無菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。

2.樣本準備（樣本處理區）

用QIAGEN、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本RNA各5 μl、終體積25μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為25 μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。

4.PCR（PCR擴增區）

（1）取樣本處理區準備好的PCR反應管，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置，并記錄放置順序。

（2）按下表設置儀器核酸擴增相關參數進行PCR擴增。

注：ABI系列熒光PCR儀在設置時不選ROX校正，設置淬滅基團選擇None。

【參考值（參考范圍）】

1.試劑盒有效性判定：

（1）陽性對照：有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。

（2）陰性對照：Ct值＞38或無Ct值，線形為直線或輕微斜線，無指數增長期。

2.標本結果判定：

（1）陽性：標本檢測結果Ct值≤35或有明顯指數增長期。

（2）可疑：標本檢測結果Ct值在35～38范圍內。此時應對標本進行重復檢測，如重復實驗結果Ct值仍在35～38范圍內，有明顯指數增長期，則判定為陽性，否則為陰性。

（3）陰性：標本檢測結果Ct值＞38或無Ct值。

【檢驗結果的解釋】

【檢驗方法的局限性】

1. 當檢測樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒的*檢出*可能會發生假陰性的結果。

2. 被檢樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中操作方式不當容易造成RNA降解而產生假陰性結果。

3. 樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中發生交叉污染，則容易得到假陽性結果。

【產品性能指標】 產品的*檢出限為10² Copies/mL，產品CV值≤5%。